DTT的作用是DTT可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。DTT对蛋白的影响是DTT也可以对蛋白质中二硫键进行还原。
DTT是DL-Dithiothreitol的缩写,中文名为二硫苏糖醇。DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部的二硫键,这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性。反之,根据DTT存在情况下,二硫键还原速度的不同,可以判断其包埋程度的深浅。
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由于容易被空气氧化,因此DTT的稳定性较差;但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命。
由于质子化的硫的亲核性较低,随着pH值的降低,DTT的有效还原性也随之降低。Trisphosphine HCl可以作为低pH值条件下DTT的替代品,而且也比DTT更为稳定。
参考资料来源:
DTT是一种很强的还原剂,其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环(含二硫键)的构象稳定性。它的氧化还原电势在pH为7时为-0.33伏。
DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原,可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部(溶剂不可及)的二硫键,这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性。
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硫键结合能力较强,典型的二硫键键离解能为60 kcal/mol (251 kJ/mol)。由于二硫键比C-C键和C-H键弱40%左右,在许多分子中二硫键往往是”弱键”。此外,S-S键反映了二价硫的极化特性,容易被极性试剂(包括亲电试剂和亲核试剂,特别是亲核试剂)切断 。
二硫键的长度约为2.05 A,比C-C键长约0.5 A。绕S-S轴旋转的势垒较低。二硫化物对接近90°的二面角有明显的偏好。当角度接近0°或180°时,二硫化物是一种更好的氧化剂。
两个R基团相同的二硫化物称为对称二硫化物的,例如二苯二硫和二甲基二硫。当两个R基团不完全相同时,该化合物被称为不对称或混合二硫化物。
参考资料来源:
DTT 是二硫键的还原剂,还可以保持酶中-SH的还原态。
在PCR反应体系中加入二硫苏糖醇(DTT),可以打断二硫键,使染色体DNA结合的蛋白质从DNA上释放出来,导致更多的DNA与引物结合,提高扩增效率。主要作用还是破坏蛋白质的稳定性。
DTT的作用是还原cys上被氧化的SH,也就是说可以把二硫桥拆开。关于是否影响活性,因为一般的蛋白活性主要依靠三级结构,还原后的蛋白的三级结构被破坏了,所以活性也就丧失了。
DTT是还原剂主要破坏蛋白质的二硫键(分子内或分子间),一般来说它影响蛋白的构象,从而对蛋白的活性有影响,如果蛋白分子内无二硫键就不会影响结构或活性。但是,有些蛋白(酶)只有在DTT或Cys存在时活性增加。
DTT为二硫苏糖醇,还原剂,可还原二硫键,对一些活性中心含有SH的酶有保护作用,防止活性中心SH的氧化。同时在植物蛋白提取时加入,可防止植物体内酚类物质氧化对酶的影响。
DTT就是二硫苏糖醇,是一种强的还原剂
在蛋白中,DTT的主要作用就是保持半胱氨酸的-SH键为还原状态,不被氧化而造成蛋白失活
对蛋白的影响主要看加入的DTT的浓度
如果浓度太低,则很难起到还原作用,蛋白依然会维持二硫键的聚体结构
如果浓度太高,则会完全打开二硫键,破坏蛋白质的高级结构
所以需要一个合适的浓度,既可以使-SH保持还原状态,也能让二硫键免遭还原
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